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PTD1控制水稻株高的分子机理研究

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PTD1控制水稻株高的分子机理研究
论文目录
 
摘要第1-5页
abstract第5-8页
缩略词中英文对照第8-14页
1 前言第14-19页
 1.1 水稻株高遗传调控研究现状第14-15页
 1.2 脂质转移蛋白的研究现状第15-16页
 1.3 本研究的工作基础第16-19页
2 材料与方法第19-45页
 2.1 材料第19-20页
  2.1.1 水稻材料第19页
  2.1.2 载体与菌种第19页
  2.1.3 主要试剂第19-20页
  2.1.4 主要仪器设备第20页
 2.2 试剂配方第20-23页
  2.2.1 分子生物学操作相关配方第20-21页
  2.2.2 蛋白分析第21-22页
  2.2.3 Y2H相关配方第22-23页
 2.3 分子生物学相关实验方法第23-36页
  2.3.1 SDSDNA微量提取第23页
  2.3.2 总RNA提取及分析第23-25页
  2.3.3 细菌培养第25页
  2.3.4 微量质粒DNA抽提第25-26页
  2.3.5 质粒酶切第26页
  2.3.6 DNA片段的琼脂糖凝胶回收及PCR产物的纯化第26-27页
  2.3.7 DNA的连接第27-28页
  2.3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第28页
  2.3.9 TransB(DE3)大肠杆菌感受态细胞的热激转化第28-29页
  2.3.10 阳性克隆的鉴定和保存第29页
  2.3.11 原核表达载体的构建第29-30页
  2.3.12 LipidTransferProtein-like17(LTPL17)定点突变载体的构建第30-32页
  2.3.13 CRISPR/Cas9载体的构建第32-35页
  2.3.14 ArsM1水稻超表达载体以及Y2H猎物载体的构建第35-36页
 2.4 WesternBlot相关实验方法第36-38页
  2.4.1 植物蛋白提取第36-37页
  2.4.2 SDS-PAGE蛋白电泳及WesternBlot第37-38页
 2.5 原核表达第38-40页
  2.5.1 重组蛋白的原核表达第38-39页
  2.5.2 原核表达菌液的裂解第39页
  2.5.3 利用AmyloseResin纯化原核表达蛋白第39-40页
 2.6 原核表达蛋白的Pull-down和SemiPull-down实验第40-41页
  2.6.1 原核表达蛋白的Pull-down实验第40页
  2.6.2 SemiPull-down实验第40-41页
 2.7 Y2H第41-45页
  2.7.1 酵母感受态细胞的准备第41-42页
  2.7.2 诱饵载体毒性与自激活检测第42-43页
  2.7.3 酵母共转化第43-45页
3 结果与分析第45-61页
 3.1 PTD1二硫键破坏导致的显性获得性功能在其它nsLTP中不具有普遍性第45-49页
  3.1.1 LTPL17氨基酸序列比对分析第45-47页
  3.1.2 LTPL17的基因组序列扩增以及保守Cys替换突变载体的构建第47页
  3.1.3 转基因植株的表达分析及表型观察第47-49页
 3.2 利用SemiPull-down质谱分析法筛选PTD1候选互作因子第49-53页
  3.2.1 MBP-ptd1以及MBP-PTD1的原核表达第49-50页
  3.2.2 提取ZH11嫩茎总蛋白进行SemiPull-down第50-51页
  3.2.3 质谱分析以及KEGG通路注释分析第51-53页
 3.3 PTD1与候选因子的互作验证第53-56页
  3.3.1 Y2H验证PTD1与ArsM1的互作第53-54页
  3.3.2 Pull-down验证PTD1与OsUBC25的互作第54-56页
 3.4 候选互作因子的基因功能分析第56-59页
  3.4.1 构建ArsM1基因的超表达载体和敲除载体第56-57页
  3.4.2 OsUBC25敲除植株的基因型分析以及表型观察第57-59页
 3.5 BR途径相关基因在PTD1突变体中的表达分析第59-61页
4 讨论与结论第61-65页
 4.1 PTD1二硫键破坏导致的显性获得性功能可能与其互作因子有关第61页
 4.2 候选互作因子ArsM1和OsUBC25可能导致矮化的机制解释第61-63页
 4.3 利用Co-immunoprecipitation(Co-IP)体内互作实验验证候选互作因子ArsM1第63页
 4.4 利用蛋白质组技术验证候选因子OsUBC25导致矮化的作用机制第63页
 4.5 突变体PTD1中存在BR信号传导途径异常第63页
 4.6 结论第63-65页
致谢第65-66页
参考文献第66-71页
附录第71-84页

本篇论文共84页,点击这进入下载页面
 
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