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基于MultiBac多基因表达系统的BmCPV病毒VLPs组装研究

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基于MultiBac多基因表达系统的BmCPV病毒VLPs组装研究
论文目录
 
摘要第1-5页
abstract第5-7页
英文缩写词第7-11页
1 前言第11-28页
 1.1 BmCPV概述第11-15页
  1.1.1 BmCPV的生物学特性第11-12页
  1.1.2 BmCPV基因组及其结构学特性第12-15页
 1.2 杆状病毒多基因表达系统概述第15-19页
 1.3 VLPs概述第19-25页
  1.3.1 基于VLPs的预防型疫苗及治疗型疫苗第19-22页
  1.3.2 VLPs作为多功能的运输工具及包装载体第22-24页
  1.3.3 表达VLPs的系统及方式第24-25页
 1.4 本课题研究的内容及意义第25-27页
 1.5 技术路线图第27-28页
2 材料与方法第28-43页
 2.1 实验材料第28-31页
  2.1.1 相关基因、质粒、菌株、细胞第28页
  2.1.2 实验常用溶液及试剂的配制第28-30页
  2.1.3 实验所需实验设备及相关试剂第30-31页
 2.2 分子生物学实验方法第31-38页
  2.2.1 引物设计及合成第31-32页
  2.2.2 BmCPV总RNA提取第32页
  2.2.3 第一链cDNA合成第32-33页
  2.2.4 CSP和LPP基因的扩增第33-34页
  2.2.5 CSP和LPP基因PCR产物纯化回收第34-35页
  2.2.6 LPP基因的TA克隆第35页
  2.2.7 转移载体pF-LPP-eGFP和pU-CSP-mCherry构建第35-38页
  2.2.8 双酶切鉴定转移载体pF-LPP-eGFP和pU-CSP-mCherry第38页
 2.3 CSP、LPP及CSP-LPP重组菌株的构建第38-39页
 2.4 昆虫细胞培养方法第39-40页
 2.5 侵染蛋白介导的生产感染性重组病毒第40页
 2.6 目的蛋白CSP、LPP、CSP-LPP在Sf9细胞表达及检测第40-41页
 2.7 蔗糖密度梯度法纯化两种VLPs第41-42页
  2.7.1 重组杆状病毒侵染Sf9细胞第41-42页
  2.7.2 超声破碎重组病毒侵染的Sf9细胞第42页
  2.7.3 两种VLPs蔗糖密度梯度离心第42页
 2.8 电镜观察两种VLPs第42页
 2.9 生物信息学分析第42-43页
  2.9.1 密码子偏爱性比对第42-43页
  2.9.2 CSP和LPP氨基酸分析第43页
3 结果与分析第43-58页
 3.1 CSP、LPP基因与Sf9细胞密码子偏爱性对比第43-46页
 3.2 BmCPV总RNA提取和RT-PCR第46页
 3.3 pU-CSP-His-mCherry和pF-LPP-His-eGFP转移载体的构建第46-49页
 3.4 CSP和LPP蛋白质分析第49-50页
  3.4.1 CSP和LPP蛋白质理化性质分析第49页
  3.4.2 CSP和LPP同源建模第49-50页
 3.5 CSP、LPP及CSP-LPP重组菌株的构建第50-52页
 3.6 侵染蛋白介导的生产感染性重组病毒第52-53页
 3.7 CSP、LPP及CSP-LPP的Westernblot检测第53页
 3.8 两种VLPs的纯化及电镜观察第53-58页
  3.8.1 两种VLP纯化前及纯化后免疫印迹鉴定第53-55页
  3.8.2 两种VLPs的电镜观察第55-58页
4 讨论与结论第58-64页
 4.1 讨论第58-63页
  4.1.1 VLPs纯化及电镜结果讨论第58-59页
  4.1.2 CSP和LPP密码子优化方案第59-60页
  4.1.3 CSP与LPP序列分析第60-61页
  4.1.4 杆状病毒多基因表达系统的优势第61-62页
  4.1.5 共组装VLPs前景展望第62-63页
 4.2 结论第63-64页
致谢第64-66页
参考文献第66-71页
附录第71-76页
资助项目第76页

本篇论文共76页,点击这进入下载页面
 
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