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小菜蛾GNBP2调控抗菌肽表达的研究

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小菜蛾GNBP2调控抗菌肽表达的研究
论文目录
 
摘要第1-5页
abstract第5-7页
缩写词及中英文对照第7-12页
1 前言第12-26页
 1.1 昆虫免疫系统的研究第12-16页
  1.1.1 昆虫的免疫识别第13-14页
  1.1.2 昆虫的体液免疫第14-15页
  1.1.3 昆虫的细胞免疫第15-16页
 1.2 GNBP基因的研究进展第16-17页
 1.3 昆虫免疫系统中Toll和Imd信号通路第17-19页
  1.3.1 Toll通路第17-18页
  1.3.2 Imd通路第18-19页
 1.4 抗菌肽的研究第19-22页
  1.4.1 昆虫抗菌肽的研究第19-20页
  1.4.2 抗菌肽的抗菌作用机理第20-21页
  1.4.3 抗菌肽的应用第21-22页
 1.5 RNAi技术及应用第22-25页
  1.5.1 RNAi技术第22-23页
  1.5.2 RNAi的通路第23页
  1.5.3 RNAi导入方法第23-24页
  1.5.4 RNAi技术的应用第24-25页
 1.6 研究目的和意义第25-26页
2 实验材料第26-30页
 2.1 小菜蛾第26页
 2.2 试验动物第26页
 2.3 载体和菌株第26页
  2.3.1 载体第26页
  2.3.2 菌株第26页
 2.4 主要试剂药品第26-27页
 2.5 主要仪器设备第27页
 2.6 主要培养基第27页
 2.7 主要试剂的配制第27-28页
 2.8 SDS-PAGE相关溶液的配制第28-29页
 2.9 Western Blot相关溶液的配制第29页
 2.10 蛋白纯化相关溶液的配制第29页
 2.11 酶联免疫反应(ELISA)相关溶液的配制第29-30页
3 实验方法第30-51页
 3.1 PxGNBP2基因的克隆及序列分析第30-38页
  3.1.1 总RNA的提取及检测第30页
  3.1.2 PxGNBP2基因Unigene序列的扩增第30-35页
  3.1.3 PxGNBP2基因全长序列的获得第35-38页
  3.1.4 PxGNBP2基因全序列的拼接和序列分析第38页
 3.2 小菜蛾PxGNBP2基因的原核表达与多克隆抗体的制备第38-44页
  3.2.1 小菜蛾PxGNBP2基因的原核表达第38-42页
  3.2.2 多克隆抗体的制备第42-44页
 3.3 小菜蛾PxGNBP2基因的时空表达模式分析第44-45页
  3.3.1 PxGNBP2基因的时空表达特异性分析第44-45页
 3.4 不同病原微生物对PxGNBP2基因的表达量影响第45-46页
  3.4.1 微生物的培养第45-46页
  3.4.2 不同微生物的处理及样品的收集第46页
 3.5 PxGNBP2基因的RNAi第46-51页
  3.5.1 试剂盒合成dsRNA第46-48页
  3.5.2 重组表达菌株的筛选及功能的验证第48-51页
4 结果与分析第51-70页
 4.1 小菜蛾PxGNBP2基因全长序列的获得第51-57页
  4.1.1 小菜蛾PxGNBP2基因Unigene序列的PCR扩增第51页
  4.1.2 小菜蛾PxGNBP2基因同源片段的克隆第51-52页
  4.1.3 小菜蛾PxGNBP2基因3’和5’端序列的扩增第52-53页
  4.1.4 小菜蛾PxGNBP2基因全长序列的拼接与分析第53-56页
  4.1.5 小菜蛾PxGNBP2基因与其它物种βGRP家族基因的进化关系比较第56-57页
 4.2 小菜蛾PxGNBP2基因表达模式分析第57-60页
  4.2.1 小菜蛾PxGNBP2基因在不同龄期的表达特异性第57-58页
  4.2.2 小菜蛾PxGNBP2基因在不同组织中的表达特异性第58页
  4.2.3 不同微生物侵染后PxGNBP2基因的表达模式分析第58-60页
 4.3 小菜蛾PxGNBP2基因的原核表达与多克隆抗体制备第60-65页
  4.3.1 小菜蛾PxGNBP2基因表达片段的扩增第60-61页
  4.3.2 小菜蛾PxGNBP2基因原核表达载体的构建第61-62页
  4.3.3 小菜蛾PxGNBP2基因蛋白的表达与纯化第62-63页
  4.3.4 小菜蛾PxGNBP2的Western blot检测第63-64页
  4.3.5 多克隆抗体anti-PxGNBP2的制备与检测第64-65页
 4.4 注射dsRNA后PxGNBP2基因的表达第65页
 4.5 重组菌株的构建第65-70页
  4.5.1 L4440-PxGNBP2重组表达载体的构建第65-66页
  4.5.2 重组菌株HT115的检测第66-67页
  4.5.3 HT115工程菌株对小菜蛾PxGNBP2基因的沉默检测第67-68页
  4.5.4 HT115工程菌株对小菜蛾抗菌肽基因的沉默检测第68-70页
5 结论与讨论第70-75页
 5.1 结论第70页
 5.2 讨论第70-74页
  5.2.1 小菜蛾PxGNBP2基因的克隆第70-71页
  5.2.2 PxGNBP2基因对微生物的敏感性第71-72页
  5.2.3 RNAi分析第72-74页
 5.3 本研究的创新点第74页
 5.4 展望第74-75页
致谢第75-77页
参考文献第77-87页
附录Ⅰ 引物序第87-89页
附录Ⅱ T克隆载体图谱(pMD18-T)第89-90页
附录Ⅲ 蛋白表达载体图谱(pGEX4T-1)第90-91页
附录Ⅳ 重组表达载体图谱(L4440)第91-92页
附录Ⅴ 攻读硕士期间科研成果第92页

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